2.4 TET对NB细胞相关蛋白表达水平的影响考察

    采用Western blotting法检测。取对数生长期IMR-32细胞和SH-SY5Y细胞，按照“2.3.1”项下方法分组，经胰酶消化，1 500 r/min离心15 min后以4.0×105个/mL接种于6孔板内，待细胞贴壁后分别加入终浓度为0 μmol/L(正常对照组)、10 μmol/L(IMR-32细胞，TET组)或15 μmol/L(SH-SY5Y细胞，TET组)的TET甲醇溶液，置于37 ℃、5%CO2培养箱培养24 h。使用RIPA裂解液裂解并提取总蛋白，以BCA法测定蛋白浓度以确定上样浓度。所获蛋白以上样缓冲液×6作变性处理后，使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)凝胶电泳分离，110 V电压转膜；使用5%脱脂奶粉封闭1 h，加MMP-2抗体(1 ∶ 1 000)、MMP-9抗体(1 ∶ 1 000)、β-catenin抗体(1 ∶ 1 000)、GSK3β抗体(1 ∶ 1 000)、p-GSK3β抗体(1 ∶ 1 000)及β-actin抗体(1 ∶ 2 000) ......