2.4 细胞分组与给药

    试验共设置5个组，分别为敏感组、耐药组、索拉非尼组(阳性对照)、脱脂膏组和CⅡ-3组。敏感组加入HepG2细胞，其余4组均加入HepG2/ADM细胞。给药时，敏感组和耐药组细胞加入常规培养基，其余3组分别加入含相应药物的培养基(终质量浓度均为各自的IC20)。

    2.5 美洲大蠊提取物对HepG2/ADM细胞中药物累积的影响考察

    采用激光扫描共聚焦显微技术进行测定。取对数生长期的两种细胞，分别以0.25%胰酶消化后，用常规培养基制成单细胞悬液，按8×106个/皿的细胞密度接种于放有爬片的小皿中(直径3 cm)，摇匀，于培养箱中培养24 h。细胞培养完毕后，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗，然后按“2.4”项下方法进行分组、给药，每组设置10个复孔。各组细胞培养48 h后，以PBS清洗，再加入含5 μg/mL ADM的培养基，继续培养2 h;取出后用冷PBS清洗5 min×3次，加入4%多聚甲醛避光固定30 min;再用冷PBS清洗5 min×2次，加入DAPI核染5 min;然后用冷PBS清洗5 min×3次;最后 ......