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编号:13174635
蛇足石杉内生真菌抗乙酰胆碱酯酶活性筛选及分类鉴定(2)
http://www.100md.com 2012年12月15日 《中国中药杂志》 2012年第24期
     2.5 内生真菌分子生物学鉴定

    2.5.1 内生真菌基因组DNA提取 将内生真菌接入PDA液体培养基中,28 ℃,120 r·min-1摇瓶培养4 d,发酵液转入无菌离心管中,12 000 r·min-1离心收集菌体,用无菌ddH2O冲洗菌体3~4次,并用无菌滤纸过滤处理,取少量菌丝体,加入液氮充分研磨,用植物基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

    2.5.2 5.8S rDNA的PCR扩增 扩增体系(50 μL):10×PCR buffer(5 μL,Mg2+ free);Mg2+(1.5 μL,50 mmol·L-1),dNTP(1 μL,10 mmol·L-1);Primer ITS1(1 μL,10 μmol·L-1);Primer ITS4(1 μL ......
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