外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗伤害缓解作用的研究(1)
重庆三峡库区植物生态与资源重点实验室， 重庆 400715)
[摘要] 为了盐碱地开发利用及射干的栽培管理提供理论依据，该实验通过外施外源物质SNP，Spd来缓解NaCl，Na2SO4，NaHCO3，Na2CO3 4种盐的摩尔比为9∶1∶9∶1，盐浓度为100 mmol·L-1的混合盐碱胁迫对射干幼苗造成的伤害，实验结果显示高pH胁迫是造成盐碱胁迫的主要因素，时间和各处理浓度之间有交互作用，盐，碱胁迫之间有协同效应。在100 mmol·L-1的盐碱胁迫下射干幼苗叶片中质膜过氧化指标(MDA，O-·2)和代谢产物(可溶性蛋白，可溶性糖，有机酸)的含量均呈现不同程度的上升趋势。经过不同浓度的SNP，Spd处理后，MDA和O-·2显著降低，并且有效提高了代谢产物的含量，其中SNP(0.05 mmol·L-1)和Spd(0.5 mmol·L-1)缓解伤害效果最佳。研究结果说明SNP，Spd能有效缓减盐碱胁迫对射干幼苗的伤害，提高射干幼苗的耐盐碱能力，从而为盐碱地的利用和射干种植提供科学基础。
, http://www.100md.com
[关键词] 盐碱胁迫;外源物质;射干幼苗;伤害缓解;生理生化指标
[收稿日期] 2014-05-27
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30070080)
[通信作者] *何平，教授，博士生导师，Tel：(023)68254122，E-mail：heping196373@126.com
[作者简介] 徐梦平，硕士研究生，Tel：18883342571，E-mail：1liu2qian3han@163.com
射干Belamcanda chinensis (L.) DC.为鸢尾科多年生草本植物，是目前市场上紧缺的名贵中药材之一[1]。近年来发现射干耐盐碱，利用耐盐碱的植物对土壤盐碱化进行改良是在众多的生物措施中最为生态科学的[2]。选择耐盐碱的植物，了解植物的耐盐碱机制，以及怎样提高植物的耐盐碱性已成为当务之急，许多学者研究证明目前利用外源物质提高植物的抗逆性是一条非常有用的途径。本实验选用外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗进行恢复，以明确射干对盐碱胁迫缓解的适宜浓度，从而为盐碱地的利用以及射干开发与改良提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料
供试的射干种子由河北安国胜利药材种子市场提供，经何平教授鉴定为B. chinensis的干燥成熟种子。Spd为Sigma公司生产，外源一氧化氮供体硝普钠(SNP)由韩国KAIST提供。
2 方法
每盆留长势整齐且健壮的4株幼苗，待其长至三叶一心时。选择经预实验证明的较为合适的浓度即 NaCl，Na2SO4，NaHCO3，Na2CO3 4种盐的摩尔比为9∶1∶9∶1，盐浓度为100 mmol·L-1溶液胁迫处理射干幼苗，并用SNP，Spd 2种外源恢复物质来做恢复实验，每种物质共设计6个处理梯度，包括空白对照组CK1、混合盐胁迫对照组CK2、不同浓度SNP处理组T1～T4，不同浓度Spd处理组T5～T8，见表1。每处理设置3个重复，每隔2 d向花盆内添加恢复液直到花盆里面的土淋透为止。分别在盐碱胁迫后第10，20，30天取样测定，测量O-·2，MDA，可溶性蛋白，可溶性糖时均称取0.3 g鲜叶用于酶液提取，测量3种有机酸时准确称取0.1 g干样进行HPLC的样品制备。
, http://www.100md.com
叶片中丙二醛(MDA)含量测定方法参照Velikova等的硫代巴比妥酸(TBA)检测法[3];用羟胺氧化反应测定O-·2含量[4];可溶性蛋白值采用张志良的方法测定[5];可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定[6];高效液相色谱法测量幼叶及根中3种有机酸含量：岛津高效液相色谱仪(LC-20)，草酸、柠檬酸、丁二酸对照品购于国家标准物质中心(HPLC≥98%)。色谱条件：Phenomenex C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-NaH2PO4(3∶97)，用磷酸
表1 对射干幼苗处理的不同组合
Table 1 Belamcanda chinensis seedlings treated by different combinations
处理NaCl-Na2SO4-NaHCO3-
Na2CO3(9∶1∶9∶1)SNP
, 百拇医药
/mmol·L-1Spd
/mmol·L-1
CK1000
CK210000
T11000.50
T210010
T31000.250
T41000.50
T510000.5
T610001
T710000.25
T810000.5
, http://www.100md.com
调pH至2.0;流速1.0 mL·min-1;每次进样量15 μL，检测波长210 nm;柱温25 ℃，使用前用0.45 μm滤膜过滤，超声脱气。在该色谱条件下进行草酸、柠檬酸、丁二酸含量的测定。
数据采用SPSS 19.0 软件进行重复度量和单因素方差分析。并用Duncan′s多重比较法检验每个生理指标(α=0.05)的差异显著性。文中图表均采用 Excel 2003软件根据SPSS分析结果制作。
3 结果与分析
3.1 外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗质膜过氧化物指标的影响
3.1.1 外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗叶片中超氧阴离子产生速率(O-·2)的影响 经过SNP处理后的射干幼苗，球形检验结果显示， P<0.05，不满足球形检验，进行自由度调整，主体内效应检验结果显示，各个时间点上的数据有统计学上显著差异(P<0.001);时间和各处理浓度之间有交互作用(P<0.05)，说明时间因素的作用随着各处理浓度的不同而不同;主体间效应检验结果显示，各处理浓度之间没有显著差异，即各处理浓度缓解盐碱胁迫下射干幼苗中超氧阴离子产生速率的作用不显著。, 百拇医药(徐梦平 何平 段才绪 杨牟)
[摘要] 为了盐碱地开发利用及射干的栽培管理提供理论依据，该实验通过外施外源物质SNP，Spd来缓解NaCl，Na2SO4，NaHCO3，Na2CO3 4种盐的摩尔比为9∶1∶9∶1，盐浓度为100 mmol·L-1的混合盐碱胁迫对射干幼苗造成的伤害，实验结果显示高pH胁迫是造成盐碱胁迫的主要因素，时间和各处理浓度之间有交互作用，盐，碱胁迫之间有协同效应。在100 mmol·L-1的盐碱胁迫下射干幼苗叶片中质膜过氧化指标(MDA，O-·2)和代谢产物(可溶性蛋白，可溶性糖，有机酸)的含量均呈现不同程度的上升趋势。经过不同浓度的SNP，Spd处理后，MDA和O-·2显著降低，并且有效提高了代谢产物的含量，其中SNP(0.05 mmol·L-1)和Spd(0.5 mmol·L-1)缓解伤害效果最佳。研究结果说明SNP，Spd能有效缓减盐碱胁迫对射干幼苗的伤害，提高射干幼苗的耐盐碱能力，从而为盐碱地的利用和射干种植提供科学基础。
, http://www.100md.com
[关键词] 盐碱胁迫;外源物质;射干幼苗;伤害缓解;生理生化指标
[收稿日期] 2014-05-27
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30070080)
[通信作者] *何平，教授，博士生导师，Tel：(023)68254122，E-mail：heping196373@126.com
[作者简介] 徐梦平，硕士研究生，Tel：18883342571，E-mail：1liu2qian3han@163.com
射干Belamcanda chinensis (L.) DC.为鸢尾科多年生草本植物，是目前市场上紧缺的名贵中药材之一[1]。近年来发现射干耐盐碱，利用耐盐碱的植物对土壤盐碱化进行改良是在众多的生物措施中最为生态科学的[2]。选择耐盐碱的植物，了解植物的耐盐碱机制，以及怎样提高植物的耐盐碱性已成为当务之急，许多学者研究证明目前利用外源物质提高植物的抗逆性是一条非常有用的途径。本实验选用外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗进行恢复，以明确射干对盐碱胁迫缓解的适宜浓度，从而为盐碱地的利用以及射干开发与改良提供理论依据。
, 百拇医药
1 材料
供试的射干种子由河北安国胜利药材种子市场提供，经何平教授鉴定为B. chinensis的干燥成熟种子。Spd为Sigma公司生产，外源一氧化氮供体硝普钠(SNP)由韩国KAIST提供。
2 方法
每盆留长势整齐且健壮的4株幼苗，待其长至三叶一心时。选择经预实验证明的较为合适的浓度即 NaCl，Na2SO4，NaHCO3，Na2CO3 4种盐的摩尔比为9∶1∶9∶1，盐浓度为100 mmol·L-1溶液胁迫处理射干幼苗，并用SNP，Spd 2种外源恢复物质来做恢复实验，每种物质共设计6个处理梯度，包括空白对照组CK1、混合盐胁迫对照组CK2、不同浓度SNP处理组T1～T4，不同浓度Spd处理组T5～T8，见表1。每处理设置3个重复，每隔2 d向花盆内添加恢复液直到花盆里面的土淋透为止。分别在盐碱胁迫后第10，20，30天取样测定，测量O-·2，MDA，可溶性蛋白，可溶性糖时均称取0.3 g鲜叶用于酶液提取，测量3种有机酸时准确称取0.1 g干样进行HPLC的样品制备。
, http://www.100md.com
叶片中丙二醛(MDA)含量测定方法参照Velikova等的硫代巴比妥酸(TBA)检测法[3];用羟胺氧化反应测定O-·2含量[4];可溶性蛋白值采用张志良的方法测定[5];可溶性糖含量采用蒽酮比色法测定[6];高效液相色谱法测量幼叶及根中3种有机酸含量：岛津高效液相色谱仪(LC-20)，草酸、柠檬酸、丁二酸对照品购于国家标准物质中心(HPLC≥98%)。色谱条件：Phenomenex C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-NaH2PO4(3∶97)，用磷酸
表1 对射干幼苗处理的不同组合
Table 1 Belamcanda chinensis seedlings treated by different combinations
处理NaCl-Na2SO4-NaHCO3-
Na2CO3(9∶1∶9∶1)SNP
, 百拇医药
/mmol·L-1Spd
/mmol·L-1
CK1000
CK210000
T11000.50
T210010
T31000.250
T41000.50
T510000.5
T610001
T710000.25
T810000.5
, http://www.100md.com
调pH至2.0;流速1.0 mL·min-1;每次进样量15 μL，检测波长210 nm;柱温25 ℃，使用前用0.45 μm滤膜过滤，超声脱气。在该色谱条件下进行草酸、柠檬酸、丁二酸含量的测定。
数据采用SPSS 19.0 软件进行重复度量和单因素方差分析。并用Duncan′s多重比较法检验每个生理指标(α=0.05)的差异显著性。文中图表均采用 Excel 2003软件根据SPSS分析结果制作。
3 结果与分析
3.1 外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗质膜过氧化物指标的影响
3.1.1 外源物质SNP，Spd对盐碱胁迫下射干幼苗叶片中超氧阴离子产生速率(O-·2)的影响 经过SNP处理后的射干幼苗，球形检验结果显示， P<0.05，不满足球形检验，进行自由度调整，主体内效应检验结果显示，各个时间点上的数据有统计学上显著差异(P<0.001);时间和各处理浓度之间有交互作用(P<0.05)，说明时间因素的作用随着各处理浓度的不同而不同;主体间效应检验结果显示，各处理浓度之间没有显著差异，即各处理浓度缓解盐碱胁迫下射干幼苗中超氧阴离子产生速率的作用不显著。, 百拇医药(徐梦平 何平 段才绪 杨牟)