川牛膝CoObgC基因克隆、亚细胞定位及表达分析(3)
3.2.4CoObgC序列比对和系统进化树分析为确立CoObgC在不同物种间的进化关系，用氨基酸在NCBI选取其他物种序列，包括细菌、绿藻、胚生植物、单子叶以及双子叶植物，利用NJ法构建系统进化树(图5)，分析物种间亲缘关系。以上5种类群明显聚为5类，而川牛膝CoObgC与双子叶藜科甜菜聚集在一起，遗传距离较近，其次为番茄、土豆、烟草等，再次为单子叶、细菌等物种，符合生物进化规律。
3.3亚细胞定位分析
以总RNA为模板，通过KpnIF和SpeIR引物PCR扩增目的片段，经酶切纯化，连接转化大肠感觉DH5α感受态，PCR鉴定单克隆菌落，扩大培养提取质粒酶切鉴定(图6)，序列BLAST证明重组载体构建成功。
将正确重组质粒转化农杆菌GV3.101感受态，对幼嫩烟草叶片进行融合蛋白瞬时表达，观察CoObgC定位于叶绿体(图7)，与Target1.1 Server预测结果一致。
3.4CoObgC基因组织表达分析
采用实时荧光定量的方法对川牛膝根、茎、叶、花各组织进行CoObgC基因表达差异分析 ......
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3.3亚细胞定位分析
以总RNA为模板，通过KpnIF和SpeIR引物PCR扩增目的片段，经酶切纯化，连接转化大肠感觉DH5α感受态，PCR鉴定单克隆菌落，扩大培养提取质粒酶切鉴定(图6)，序列BLAST证明重组载体构建成功。
将正确重组质粒转化农杆菌GV3.101感受态，对幼嫩烟草叶片进行融合蛋白瞬时表达，观察CoObgC定位于叶绿体(图7)，与Target1.1 Server预测结果一致。
3.4CoObgC基因组织表达分析
采用实时荧光定量的方法对川牛膝根、茎、叶、花各组织进行CoObgC基因表达差异分析 ......
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