中药穿山甲的DNA分子鉴定研究(3)

http://www.100md.com 2017年6月1日 《中国中药杂志》2017年第11期

     本研究通过特异引物筛选和条件优化，确定20 μL PCR反应体系时，基于COⅠ序列设计的引物COⅠ-S10/A5在DNA模板加样量3～100 ng，退火温度55～60 ℃时，扩增35个循环可将正品中华穿山甲与其他伪品进行有效的鉴别。由于穿山甲样品组织的特殊性，选用了Promega Wizard SV Genomic DNA Purification System进行穿山甲鳞甲和筋膜的DNA提取。该方法操作简单，无酚、氯仿等污染，提取的穿山甲DNA经微量核酸定量仪检测，其质量浓度在5～100 mg·L^-1，可直接用于本文所筛选的特异性引物进行鉴定。本研究采用该试剂盒进行了炮制穿山甲片DNA的提取实验，发现取样量20 mg左右时，DNA量为5～20 mg·L^-1，且蛋白和小分子污染较为严重，采用特异性引物进行鉴别时重复性不高，因此对于炮制甲片的鉴别研究有待进一步优化实验过程。

    对于标记片段，分别扩增了线粒体基因片段COⅠ(cytochrome oxidaseⅠ)和Cytb(cytochrome b)，其中COⅠ序列为目前研究者普遍推荐的动物DNA通用条形码序列 ......