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编号:13546041
不同提取法炮制对水蛭体外溶栓活性的影响(3)
http://www.100md.com 2019年6月15日 《世界中医药》 201912
     纤维蛋白原平板的制备:用pH值7.4的磷酸盐缓冲液(PBS)配置3%的琼脂溶液,加热至90 ℃使其完全融化,待冷却至75℃左右,取20mL琼脂溶液与10 mL用pH值7.4的PBS配置的0.1%的纤维蛋白原溶液混匀,立即倒入经高压蒸汽灭菌后的直径为10 cm的培养皿中,轻轻摇匀,冷却静置约30 min琼脂完全凝固后,打出直径为8 mm的孔,打孔后用移液枪小心将孔中液体吸出,备用。

    纤溶活性测定:分别精密吸取水蛭各样品溶液、阳性对照品(尿激酶)、空白试剂各120 μL(其中水提样品以水为空白对照,仿生提取样品以空白酶解液为空白对照,空白酶解液按仿生提取法所述,除不加水蛭样品外,其余操作相同),同板加样,置于恒温(37 ℃)培养箱中培养20 h取出观察。

    1.2.4 大鼠体外溶栓实验

    血栓的制备:从大鼠腹主动脉取血于无菌离心管中,4 ℃放置自然凝血5 h,待凝固后取出,用手术刀将血凝块均分[10-12],每块约0.2 g,分别用生理盐水漂洗至无颜色以除去表面黏附的血细胞和杂质,将血凝块烘干称重(W1),并随机放入无菌离心管中,分为4组,每组3支平行管。

    溶栓活性测定:向每组离心管中分别加入水蛭各样品溶液、空白试剂各3 mL(其中水提样品以生理盐水为空白对照 ......
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