慢性乙型肝炎患者肝组织中HBV cccDNA定量检测与基因型的相关性分析(2)
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HBV-DNA基因分型检测也可以用ELISA法得以实现，主要是采用第一军医大学基础部生物医学诊断研究中心HBV基因分型微板核酸杂交试剂盒，对HBV2DNA定性检测阳性标本进行基因分型。(1)取处理液100μL于0.5 mL离心管内，加待测血清100μL，混匀，100℃煮沸15 min，12 000 r/min离心5 min，取上清液12μL于反应液管内，弹匀，10 000 r/min离心10 s，上机，预变性94℃ 2 min；循环条件：94℃ 50 s，55℃ 50 s，72℃ 65 s，共循环38次，最后72℃延伸3 min(阴性、阳性参照同标本处理)。(2)取扩增产物变性，98℃ 10 min，迅速冰浴10 min。各取杂交液90μL、已变性产物20μL、各型核酸探针25μL分别加入反应孔内，同时设空白对照(只加4滴杂交液及显色探针25μL)，轻轻摇动混匀，50℃水浴60 min，轻轻倒净液体。(3)于每孔中加入杂交洗液200μL，50℃ 3～5 min，轻轻倒净再重复洗2次。(4)每孔加显色剂A、B各1滴，避光，置37℃ 10 min后加入终止液2滴，结果判定按P/N值(标本OD值/阴性参照OD值)<3.0为阴性，P/N值≥3.0为阳性。常规肝穿刺取得肝组织，部分组织条放入高压灭菌EP管内，立即放入-70℃的冰箱内保存。采用ligh tcycler核酸扩增仪行肝组织HBV cccDNA及肝组织HBV-DNA和血清HBV-DNA定量测定。HBV cccDNA检测采用绍俊彬等设计的巢式PCR法。
1.3?统计学处理
采用SPSS18.0统计学软件进行数据分析，计量资料以()表示，组间比较采用独立样本t检验，组内比较采用配对t检验 ......
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