检测细胞中1—磷酸鞘氨醇含量的LC—MS/MS分析方法的建立(1)
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[摘要] 目的 建立并确证可以检测1-磷酸鞘氨醇(S1P)快速、灵敏、特异的LC-MS/MS定量分析方法。 方法 采用C17-S1P作为内参，甲醇一步法进行蛋白沉淀，随后进行正相电喷雾离子化LC-MS/MS分析。流动相为甲醇-0.1%甲酸水(95∶5，v/v)，流速0.2 mL/min，每个样品的分析时间为4 min。细胞经TNF-α处理后S1P含量显著增加；而经DMS处理后S1P含量显著下降。 结果 S1P的标准曲线线性范围为0.1～10 ng/mL。相关系数r2均大于0.989。 结论 该方法可以快速，灵敏，特异性地同时检测生物样品中S1P的含量。
[关键词]含量测定；1-磷酸鞘氨醇；液质联用
[中图分类号] R743.3 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616(2013)09-09-03
鞘磷脂不仅是细胞膜的主要成分，也可作为信号分子调控多种细胞进程，包括细胞增殖，分化，存活，死亡以及一些细胞的炎症反应[1-2]。几种磷脂类代谢物，特别是鞘氨醇(Sph)和1-磷酸鞘氨醇(S1P)被认为是具有显著生物活性的关键分子，控制着细胞生存和死亡。S1P可以被S1P磷酸酶去磷酸化为Sph。Sph作为负性调节因子，抑制细胞增殖和促进凋亡。相反，S1P作为Sph的磷酸化产物，参与了促进细胞增殖和抑制凋亡过程[3]。目前已有一些方法用于测定生物样品中低丰度的S1P含量。这些方法包括放射性同位素掺入酶促反应实验[4]，放射性受体结合实验[5]，HPLC柱前衍生化[6-7]，质谱[8-9]以及LC-MS/MS等。
在本研究中，我们建立了一种快速，简便，灵敏的LC-
MS/MS分析方法 ......
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